“
为了庆祝我副神经分支上的带状疱疹终于进入新的阶段,给自己一个不好好学习的时间~遥记得在见习就一直很畏惧血液科以及肾内科,因为其庞大复杂的知识体系让我觉得自己always是个智障……其中最可怕的就是你拿着一份电泳报告,写的都是中文但连在一起都不知道有个什么卵用……决定怒刚一波!
一脸懵逼之血清蛋白电泳
多看也懵逼
氨基酸有一个氨基和羧基,也就是一个掌管碱,一个掌管酸,当环境的酸碱度势均力敌于是蛋白质就正负电荷平衡(等电点),而电泳的原理就是在PH=8的游泳池里,让蛋白质们都带上负电,于是大家都能往同一个方向前进,并在相同的电场中游泳比赛,最后按照成绩宣布名次,就是我们的蛋白电泳图,这里的区分因素为“游泳速度”,既和分子量大小又和电荷数相关,细心地人一定很奇怪为什么会有两个变量,不像WesternBlot一样让所有蛋白都带上一个SDS好定量分析呢,那是因为……先有了电泳结果才人为分的类啊!
比赛规则了解清楚之后,接下来就要介绍一下我们的比赛选手:在血清蛋白电泳大赛中首先出场的是来自“刚果”(肝的谐音)的白蛋白代表队,可以说是他们的主力部队,次次比赛都能抢占先机,其次迎面走来的是我们的“阿联球”(一群球蛋白)代表队,其内部常常举行友谊赛,其中稍占下风的就是主要为“淋巴细胞”为祖籍的γ球蛋白。
血清电泳的条带及其对应蛋白示意图
当一个国家的体育实力强劲到一定程度的时候,拿第一已经是小case了,那怎么才能证明自己在进步呢,那就比人数啊!例如乒乓球我们的目标都是要包揽前三名的好嘛!于是利用光密度仪,我们就把这个定性的电泳图变成一个半定量的扫描图:
血清蛋白电泳扫描图
当然有些图可见的β蛋白条带能分析出两个峰(β1和β2)是因为用了毛细管电泳仪,医院都是捏在一起分析的~
至此做一个小结:
看到这样的图重要性就不用我说了吧
这里面有几个比较懵逼的名词:急性期反应蛋白(APRP);正向;负向,简单而言急性反应蛋白就是血清中应对炎症反应从而发生浓度上调(正向)和下降(负向)的蛋白质,对于提示感染、创伤、肿瘤有一定的作用。(如果对这部分感兴趣的话后续再开一篇详说)
因此,血清蛋白电泳的意义就在于对肝脏疾病、肾脏疾病、炎症性疾病(感染性、自免性)可进行辅助的提示和说明。
白蛋白区面积降低;
α2球蛋白区面积上升;
γ球蛋白区面积可下降;
肾病综合征的诊断条件为低白蛋白血症及高尿蛋白,其肾小球滤过膜的损害导致蛋白的漏出,起初为选择性蛋白尿,进展为非选择性蛋白尿时就出现球蛋白的丢失,因此γ球蛋白峰下降,又因为α2巨球蛋白为人体中分子量最大的蛋白质,一般其不易漏出,反而因为低蛋白血症导致肝脏代偿性合成增加形成高峰。
白蛋白区面积降低
γ球蛋白区面积增加
形成“β-γ桥”
所谓的肝病一般指肝细胞的破坏,例如慢性肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌等,肝细胞功能的缺失导致由肝合成的蛋白的普遍降低,并且在此过程中产生的免疫反应可刺激B淋巴细胞产生的免疫球蛋白多克隆增加尤其以IgA为主(表现为宽峰),因此出现β与γ区带相互融合也就是“β-γ桥”。
α1区面积增加
常伴随白蛋白区面积的下降
急性炎症通常包括感染、创伤、手术后应激,其中α1大多为急性正向反应蛋白,同时白蛋白为负向反应蛋白,因此出现相反的变化趋势。
(多克隆球蛋白病)
α2区面积增加
γ区面积增加
慢性炎症一般可由自身免疫性疾病,慢性肝病、慢性感染(如结核)、恶性肿瘤等,此时急性反应蛋白不会有相应变化,但自身免疫一直处于低度活动状态,因此由淋巴细胞产生免疫球蛋白也相应增多,作为抑制纤溶的α2巨球蛋白也反应性升高(为了对抗高凝)。另外这一类疾病均为消耗性疾病,所以白蛋白也会有相应的小幅度下降。
(浆细胞疾病)
γ面积及峰值显著增加(窄基地,峰高尖)
白蛋白面积下降
M蛋白血症常见于多发性骨髓瘤或巨球蛋白血症,这里的M蛋白,即monoclonalprotein也就是单克隆蛋白,是由浆细胞或B细胞产生的“不正常”单克隆蛋白,可分布在β区段至γ区段之间,但因其他蛋白的影响,在γ区段的M蛋白比较容易分辨且具有特征性。
附:常见浆细胞疾病
多发性骨髓瘤(MM)
IgG型(52%)、IgA型(21%)、轻链型(15%)、不分泌型(1%)
巨球蛋白血症
M蛋白为IgM
意义未明的单株免疫球蛋白血症(MGUS)
单株免疫球蛋白一般少于10g/L,可转化成MM或巨球蛋白血症
重链病
免疫电泳发现α、γ或μ重链
原发性淀粉样变性
病理刚果红染色阳性
当然,最重要的是认清蛋白的归属地点及其代表的生理作用,这样才能分析清楚
一脸懵逼之免疫固定电泳
它想我死
所以,在如此繁杂的疾病类型中,我们对于浆细胞性疾病决不能仅仅满足于如此粗糙精度的辨别,于是在高度怀疑的时候我们就需要引入另一种比赛制度,更具有针对性地挑出我们想要的结果,也就是——血清免疫固定电泳。顾名思义就是针对免疫球蛋白的电泳,也就是对于γ区带的细化探究,不仅可以证实是否存在M蛋白,更能够明确其具体类型。
这时候有必要复习一下免疫球蛋白(抗体)的结构!
正常的免疫球蛋白(Ig)单体由两条重链,也就是图中紫色的片段(Hchain)和两条轻链,也就是图中蓝色的片段(Lchain),我们平常所说的IgA/E/G/D/M是根据其重链的种类不同形成的,其对应关系为M-μ;D-δ;A-α;G-γ;E-ε。同时也有会游离轻链,根据恒定区序列的不同分为κ和λ。
轻链是能自由通过肾小球基底膜的小分子蛋白质,在肾小管被重吸收回到血循环中,所以正常人尿中只有少量轻链存在,在尿液中检测到的轻链又称之为本-周蛋白。
所免疫固定电泳是在将血清蛋白中的免疫球蛋白分离出来后,用可被染色的特异性的抗体结合进行特异性的反应,从而显示免疫球蛋白的种类。
传说中的固定电泳
于是开开心心拿到检查报告的时候我们就要开始分析,千万不要懵逼,因为这里有几条我一般不告诉别人的原则:
1.确定有无M蛋白:单克隆蛋白在免疫固定电泳中显示狭窄而又界限明确的区带;多克隆或正常血清γ球蛋白则为弥散区带。
2.确定重链类型:是IgG?IgA?IgM?(此三种较为多见,一般只做这三个抗原抗体实验)
3.确定轻链类型:κ?λ?一般κ/λ为2:1
4.出报告
小试牛刀!
诊断:多克隆蛋白血症
各组分的条带均有弥散性地增强,因此确定为多克隆的免疫球蛋白增多。
诊断:IgAκ型单克隆免疫球蛋白病
在A的重链区段和κ区段有高染色的窄条带,可以确定为分泌型的IgA且轻链类型为κ的蛋白过度增生,在IgG区带可见其多克隆染色亮度降低,说明生理性的被抑制
诊断:IgMκ型单克隆免疫球蛋白病
在M重链区段和κ区段都有高染色的窄条带,这里为什么也伴随着IgG多克隆性增生,这可能是继发于病理性IgM增生所引起的。
诊断:IgGλ型,单克隆免疫球蛋白病
是不是觉得有点无聊了?别急,小小放个大招
诊断:IgGλ型IgAκ型单克隆免疫球蛋白
其实只要掌握住同一单克隆重链和轻链应处在同一水平线上,从显眼的高染色窄条带左右看看,对应是否有相应的轻链或重链条带,即可
诊断:IgA重链病
因为高染色的IgA条带左看右看就是没有对于平齐的轻链……
诊断:IgGκ型游离κ链病
在κ条带上显然有两个高染色的非弥散性条带
是不是看完依旧是玄学……
事实上我们绝对不能割舍地看检查,必须与临床相结合,免疫固定电泳绝对不是平白无故就作为“体检”的,在开检查之前我们要严格掌握适应症:
血清蛋白电泳发现M蛋白
血清免疫电泳没有发现异常但临床高度怀疑浆细胞疾病
存在无法解释的感觉运动性周围神经病、肾病综合征、难治性心衰、营养不良等提示原发性淀粉样变的临床情况
作为检测MM治疗效果的手段
注意必要时加抗δ及ε抗体
并且免疫固定电泳只是定性地高敏感性的检测M蛋白,不具备定量的作用!因此一定一定要和血清蛋白电泳结合使用!
你以为懵逼的事情结束了么?
naive
到这里血清蛋白的相关电泳的介绍差不多告一段落了,那么接下来给大家几个小问题:
1.什么时候需要做尿蛋白电泳?意义是什么?
2.对于未检测出与临床症状相符合的电泳结果进一步处理措施及辅助检查方案是什么?
3.对于轻链蛋白有无进一步更高敏感性的检查方案?其检测结果受什么因素影响?
……
所以说我弄完之后还是觉得自己是个智障……
所谓的辅助检查,正如我接下来的问题:这幅图中有老虎吗?
(可以说很哲学了)
(上述问题的答案敬请未来的血液系统专题)
嘻嘻你要不耐烦私聊我要答案喽~
参考文献
内科学人民卫生出版社第8版
Recognitionofmonoclonalproteins-uptodate
DiagnosisofMonoclonalGammopathies:JulioC.Delgado,MD,MS
Wikipedia相关词条
Helenalaboratories:AnImmunofixationTutorial
Proteinelectrophoresisinclinicaldiagnosis,DavidK.北京专业治白癜风的医院中科健康中国重要影响力人物