职称考辅系列推送36免疫细胞分离及相关检

　

点击上方蓝字,记得 　　一、外周血单个核细胞的分离

　　将2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液与1份34%泛影葡胺生理盐水溶液混合，其比重为1.±0.，可作为常规的淋巴细胞分离液，即Ficoll分离液。主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层。

　　二、淋巴细胞的分离

　　纯淋巴细胞群的采集是利用单核细胞在37℃和Ca2＋存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。

　　1.黏附贴壁法

　　2.吸附柱过滤法

　　3.磁铁吸引法

　　4.Percoll分离液法

　　三、T细胞和B细胞的分离

　　1.E花环沉降法

　　2.尼龙毛柱分离法

　　四、T细胞亚群的分离

　　1.亲和板结合分离法

　　2.磁性微球分离法

　　3.荧光激活细胞分离仪分离法

　　五、分离细胞的保存

　　1.短期保存技术

　　将分离的细胞用适量含10%～20%灭活小牛血清的Hanks、Tc-、RPMI或其他培养液稀释重悬。短期保存可置于4℃保存。

　　2.长期保存技术

　　液氮深低温（-℃）环境保存细胞，加入二甲亚砜作为保护剂。

　　六、分离细胞的活力测定

　　活力测定最简便常用的为台盼蓝染色法。

　　这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，通过死亡细胞与活细胞的百分比可反映细胞活力。

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T细胞表面标志及其亚群

所有的T细胞均有共同的标志性抗原--CD3。

　　CD3＋CD4＋CD8－辅助性T细胞（Th）

　　CD3＋CD4－CD8＋细胞毒性T细胞（Tc或CTL）

　　CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tr或Treg）

　　CD2　表达于全部人T细胞和NK细胞表面，因其能与绵羊红细胞（SRBC）结合，又称为绵羊红细胞受体。

　　CD3　是一种多链的糖蛋白，表达于全部T细胞表面，是T细胞的表面标志，是TCR-CD3复合物的重要组成部分。

　　CD4／CD8　CD4和CD8分子分别表达于外周血不同的T细胞亚群表面，是区分T细胞亚群的重要标志。表达CD4的主要是辅助性T细胞，表达CD8的主要是细胞毒性T细胞。其他表面标志：致有丝分裂受体、病毒受体。

……

B细胞表面标志B细胞表面的膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体是B细胞的重要表面标志。

　　膜免疫球蛋白（mIg）又称为BCR，表达于所有成熟的B细胞和大多数B细胞瘤的细胞表面，属于免疫球蛋白超家族原型，是B细胞最具特性的表面标志。

mIg的主要作用是结合特异性抗原，故又称为抗原受体。

　　成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD。

　　B细胞及其亚群的检测是研究自身免疫性疾病及疾病中免疫调节紊乱的重要指标。

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以下为本期全文推送：

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