微交流G试验和GM试验检测的方法及临

念珠菌图片

侵袭性真菌病即是以往所说的深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、粘膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。引起侵袭性真菌病的病原菌有余种，常见病原菌有念珠菌（占70%-90%）和曲霉菌（占10%-20%）。常引起侵袭性真菌病的高危因素有严重粒细胞缺乏、免疫功能低下、移植、糖尿病、肾衰、血透、慢阻肺、实体器官移植、长期激素治疗以及入住ICU等。

侵袭性真菌感染病早期诊断和治疗面临着巨大挑战，临床表现缺乏特征性，发病率高、死亡率高、漏诊率高且诊断困难，特异性诊断指标有限，继发性真菌感染常被基础疾病和治疗药物所掩盖。和检验科相关的辅助诊断方法有培养法和非培养法。血培养作用有限，阳性率较低（念珠菌感染患者血培养阳性率只有38%）。相对而言，非培养技术就突显出其优越性。真菌的检测的非培养技术常见的有G实验和GM试验。此实验敏感性高，阳性检出率高，能早期快速诊断，为临床用药提供帮助。

G试验是检测1,3-β-D-葡聚糖的试验，采用的方法是动态显色法。1,3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分，广泛存在与各种真菌，只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬，细胞壁被破坏,1,3-β-D-葡聚才能释放入血，定植情况该实验为阴性，所以G试验可区分定植和感染。G试验可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染，对于念珠菌血症而言,G试验检测是首选检查方法。G试验检测一般先于临床症状平均4天，平均早于发热5天，是早期检测的重要手段。G试验检测值70pg/ml定义为阴性，此时不建议抗真菌治疗，当检测值在70-95pg/ml时定义为灰区，此为观察期，应连续监测，当检测值95pg/ml定义为阳性,建议结合临床症状诊断治疗。

GM试验是检测半乳甘露聚糖抗原的试验，采用的方法是酶免法。半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的一种成分，GM从薄弱的菌丝顶端释放，曲霉菌感染的患者血液内存在GM。曲霉菌不入血，主要是侵袭血管壁，沿血管壁进行侵袭，进入血液。GM试验是曲霉菌病早期诊断的筛查指标。GM常于临床症状前5-8天和影像学出现异常之前7.2天出现。GM释放量与菌量呈正比，可以反映感染的程度，若两次检测阳性即可以诊断侵袭性曲霉菌感染，GM试验也可作为疗效判断的重要指标。GM实验检测值0.65ug/l定义为阴性，此时不建议抗真菌治疗。当检测值在0.65-0.85ug/l时定义为灰区，此为观察期，应连续监测，当检测值0.85ug/l时定义为阳性，建议结合临床症状诊断治疗。

G试验和GM试验常常联合检测，有助于早期快速有效的确定菌属，提高灵敏度。G试验的检测标本是血清，GM试验的检测标本是血清也可以是肺泡灌洗液。标本采集时应避免溶血，黄疸和脂血标本都会影响检测结果。标本最好在6h内检测，如不能及时检测，应保存于2-8度，不超过24h，如长期保存应保存于-20度，避免反复冻融。

检验科现定于每周二和周五做G试验和GM试验，当天下午出报告。二实验联合检测时只需采一管血（3ml）即可，采血管为专用试管，在三号楼2楼检验科微生物室领取。

曲霉菌图片

现将能引起该实验假阴性和假阳性的干扰因素罗列如下，临床医生可根据患者的实际情况对患者的病情做出正确的判断。

一、引起G试验假阳性的影响因素

1.操作过程中的污染

2.应用含有葡聚糖的纤维膜进行血液或腹膜透析者

3.静脉使用蛋白质品（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）

4.抗肿瘤药物（香菇多糖、裂殖菌多糖）

5.蘑菇类食物

二、引起G试验假阴性的影响因素

1.近平滑念珠菌、隐球菌和接合菌感染

2.免疫复合物形成

3.使用某些抗真菌药物，如卡泊芬净

4.标本防止时间过长（一般不超过6小时）

三、引起GM试验假阳性的影响因素

1.与其他细菌或真菌有交叉反应（如新生隐球菌、青霉类）

2.肠道中定植的曲霉释放的GM入血

3.谷物中存在GM，通过受损的肠粘膜进入血液

4.接受白蛋白、免疫球蛋白和其他营养液治疗者

5.血液透析

6.自身免疫性肝炎等免疫性疾病（自身抗体干扰，特别是RF）

7.使用了半合成青霉素，如哌拉西林/他唑巴坦等

8.多发性骨髓瘤（高球蛋白血症对试验的干扰）

四、引起GM试验假阴性的影响因素

1.抗体多，出现前带现象

2.释放入血的半乳甘露聚糖不持续，而很快消除

3.抗真菌药物使用

4.菌丝少，侵血管性弱

5.非粒细胞缺乏患者

6.局部感染，包括慢性肉芽肿

（检验科王孟丽）