免疫学及免疫学检验自考重点2013

既然人生的幕布已经拉开，就一定要积极的演出;既然脚步已经跨出，风雨坎坷也不能退步;既然我已把希望播在这里，就一定要坚持到胜利的谢幕……

一、各类免疫球蛋白的特点：IgG为单体分子，是血清和细胞外液中含量最高的Ig。

二、血清IgM水平升高提示有近期感染，有助于感染性疾病的早期诊断。

三、IgE介导Ⅰ型超敏反应，还可能与机体抗寄生虫免疫有关。

四、抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。

五、抗原抗体的结合性：1库伦引力（静电引力）2范登华引力3氢键结合力4疏水作用力。

六、亲和力：是指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着的引力，它是抗原抗体间固有的结合力。抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时，如再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。

七、在等价带前后分别为抗体过剩或抗原过剩，形成的沉淀物少或无，这种现象在免疫测定中称为带现象。出现在抗体过剩时，称为前带，出现在抗原过剩时，称为后带。

八、在环境因素中，凡是减弱或消除抗原抗体亲和力的因素都会使复合物解离增加。如pH改变，过高或过低的pH均可破坏离子间的静电引力仅，使抗原体的结合力下降。对亲和力较弱的反应体系而言，仅增加离子强度即可达到解离抗原体复合物的目的。

九、影响抗原反应的条件：1电解质2酸碱度3温度

十、差速离心：特点（短时间，多次用不同速度和时间离心）分离效果（粗分离，纯度和效率不高）实用范围（分子量相差大，不稳定，易变性的物质。常用于分离细胞器和病毒）

十一、盐析法是粗提血清中免疫球蛋白的常用方法

十二、凝胶层析是以各种多孔凝胶为固定相，利用物质的相对分子量不同而达到分离的一种层析技术。

十三、常用凝胶有葡萄糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物。

十四、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用蛋白质分子量差异将各种蛋白质分开。

十五、免疫间隔时间以10~20d为宜，二次以后每次间隔时间一般为7~10d。腹腔或静脉免疫，抗原能够很快进入血流，一般常用于加强免疫或颗粒性抗原的免疫。抗原极为宝贵可采用淋巴结内微量注射法，抗原只需10~微克即可获得较好的免疫效果。

十六、同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质，称为免疫佐剂。在抗血清制备中应用佐剂的目的是为了提高抗原的免疫原性，从而增强体液免疫和细胞免疫的水平，获得高效价抗体。

十七、弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂(cFA,石蜡油+羊毛脂+卡介苗)和弗氏不完全佐剂(IFA,石蜡油+羊毛脂)

十八、HAT培养基的组成与作用：HAT培养基是有由常用的细胞培养基加入次黄嘌呤，氨基碟呤和胸腺嘧啶核苷组成。常用细胞培养基提供细胞生长必需的营养物质；氨基碟呤为叶酸拮抗物，用以阻断细胞合成DNA的主要途径；次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷提供核苷酸合成的前体，使细胞能通过替代途径合成DNA.

十九、目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和层析法。

二十、凝胶沉淀实验常用的凝胶有琼脂，琼脂糖，聚丙烯酰胺等。

二十一、Mancini曲线适用于大分子抗原和长时间扩散（＞48h）的结果处理。Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散（24h）的结果处理。

二十二、免疫电泳技术是可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。对流免疫电泳是将双向免疫扩散与电泳相结合，在直流电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。

二十三、免疫电泳是将蛋白质区带电泳和双向免疫扩散相结合的免疫化学分析技术。它先利用区带电泳将样品中不同的抗原蛋白质分子在琼脂凝胶内分离成若干区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应抗血清，与已分离的抗原在琼脂凝胶内作双向免疫扩散，各种抗原与抗体特异结合，在二者比例合适处形成弧形沉淀线。免疫电泳可用于：①纯化抗原或抗体的成分分析，粗略检测其纯度；②正常和异常体液中蛋白质组成分析③不同抗体成分的研究

二十四、免疫浊度测定的基本原理是抗原，抗体在特殊缓冲液中反应而又比例合适（抗体过量时），形成的小分子可溶性免疫复合物在增浊剂的作用下，迅速形成免疫复合物微粒，使反应液出现浊度。在抗体过量且固定的条件下，形成的免疫复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增强，即待测抗原量与反应后溶液的浊度呈正相关。

二十五、伪浊度形成的原因：1标本：混浊、高血脂、长期保存或反复冻融、处理不当。2试剂：①抗体效价低于1：20会增加伪浊度；②抗血清灭活处理；③抗血清含有交叉反应性抗体；④PEG浓度过高引起血清中杂蛋白的非特异性共沉；⑤试剂污染和变质3器材：不够清洁、尘埃污染等，尤其是比色杯。4其它：缓冲液的离子类型与强度、pH及反应温度等都对浊度形成影响

二十六、间接凝集抑制实验指以已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体为诊断试剂，检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。若未出现凝集现象则说明待测标本中含有与致敏抗原相同的抗原，抗体与之结合，而使载体颗粒游离，凝集反应被抑制，间接凝集抑制试验为阳性；若出现凝集现象，说明标本中不存在与致敏抗原相同的抗原，抗体与试剂未被结合，因此仍与载体上的抗原结合，间接凝集抑制试验为阴性。

二十七、间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验，又被称为动血凝试验。胶乳凝集试验是间接凝集试验。

二十八、胶乳凝集试验分为试管法与波片法。波片法操作简单，大多用作定性试验，并可作半定量测定。胶乳试验的敏感性不及血凝试验。

二十九、抗球蛋白试验是抗球蛋白参与的一种间接血凝试验，年由Coombs建立，故又称为Coombs试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。不完全抗体多半是7S的IgG类抗体。Coombs试验利用抗球蛋白抗体，作为第二抗体起到桥梁作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集，故又称为桥梁凝集反应。

三十、协同凝集试验是反向间接凝集试验，可用于检测抗原。原理是金黄色葡萄球菌细胞壁中含有A蛋白具有与IgG（IgG3除外）的Fc段结合而不影响Fab

三十一、段活性的特性，利用金黄色葡萄球菌与IgG抗体的连接作用制成致敏载体所进行的凝集试验即为协同凝集试验。

三十二、血清总补体活性测定：50％绵羊红细胞溶血法：原理是绵羊红细胞与相应抗体结合形成的复合物可活化补体经典途径，使补体C1到C9相继在红细胞表面发生级联反应而形成跨膜小孔，细胞水分渗入，导致红细胞胀裂而发生溶血。以溶血百分率为纵坐标，血清量为横坐标绘制补体介导的溶血曲线，曲线呈S形。影响因素：①补体的溶血活性除与反应体积成反比外，还与反应液的pH、离子强度有关，随着pH、离子强度的增加，补体的溶血活性逐渐下降，钙离子和镁离子可稳定溶血系统，但过量反而抑制溶血反应。CH50测定补体经典活化途径的溶血活性，反映了补体C1-C9的综合水平，C1-C9任一成分缺陷均可使CH50降低。但与各个补体成分的蛋白含量之间并无完全的相关关系。该方法简便快速，但敏感性和重复性较差。

三十三、补体结合试验：是一经典的抗原抗体反应，利用抗原抗体结合后能激活补体原理而设计！参与补结合试验的成分有五种，分属三个系统：①反应系统，包括已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，包括绵羊红细胞和相应抗体。补体结合试验主要有以下两大类型：一直接补体结合试验：加入指示系统不出现溶血，二间接补体结合试验：加入指示系统会出现溶血反应。

三十四、血清标本遇有抗补体现象时，可用下列方法处理：①加热提高1-2摄氏度；②-20摄氏度冻融后离心去沉淀；③3mmol/L盐酸处理；④白陶土处理；⑤小白鼠肝粉处理。

三十五、酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理：①抗原或抗体吸附固相载体的表面，并保持其免疫活性；②抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，仍然保持其免疫活性和酶催化活性，测定时，待测的抗体或抗原和酶标抗原或抗体按一定的步骤与固相抗原或抗体反应。用洗涤的方法，将固相载体上的抗原抗体复合物与其它物质分开；③加入酶的底物，酶催化底物生成有色产物，有色产物的量与样品中待测抗体或抗原的量呈一定比例，通过定性或定量测定有色产物量，即可确定样品中待测物质含量。

三十六、双位点一步法：在双抗体夹心法检测抗原时，采用针对抗原分子两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，可将待测样品与酶标抗体并为一步加入。优点：使用高亲和力的单克隆抗体，双位点一步法不但操作简单、时间缩短，而且敏感性和特异性也得到显著提高。缺点：测定时应注意钩状效应，即类似于沉淀反应中的抗原过剩的后带现象。

三十七、竞争法：可用于测定抗原，又可用于测定抗体。结合于固相的酶标抗原量与待测抗原的量呈反比。待测管颜色越淡，表示样品中抗原量越多。

三十八、捕获法用于检测特异性的IgM抗体。乙肝三对包括哪些项目？分别用的什么方法？乙肝两对半检查又叫乙肝五项检查，第一对就是指表面抗原和表面抗体。第二对是e抗原和e抗体。另外一项指的是核心抗体。这个乙肝两对半主要是反映了身体里乙肝病毒感染的情况，要全面了解还需要要配合HBV-DNA的检测。乙肝HBV—DNA检测。是乙肝检测比较新的手段，它的临床意义主要是检查乙肝病毒在人体的数量;病毒复制的情况如何;乙肝患者是不是会传染给其他人、这个检查还能够反映传染性有多强;通过乙肝检查结果看是否需要治疗。以及判断乙肝患者适合用那种药物治疗和检查用药的疗效等。

三十九、ELISA中最常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。

四十、HRPTMB的显色波长是nn.

四十一、酶免疫组织化学技术最常用的酶是HRP，供氢体是二氨基联苯胺（DAB）

四十二、异硫氰酸荧光黄（FITC）最大吸收波长为nm,激发后最大发射光波长为-nm，可呈现明亮的黄绿色荧光。FITC是最常用、应用最广泛的荧光素，优点在于①人眼对黄绿色更敏感；②通常标本中的绿色自发荧光较红色为少，有利于减弱背景干扰。

四十三、标本制作要求①标本尽量薄些②保持抗原的完整性可采用多种有机溶剂作为固定剂，其中最常用的是丙酮和乙醇。制备好的标本片最好立即进行荧光染色检查。

四十四、直接染色法：将特异性荧光抗体直接加在固定的待检抗原标本上，使之与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。评价：简便快速、特异性高，但敏感性较差。

四十五、间接染色法：鉴定未知抗原或未知抗体。评价：敏感性较高，通常比直接法高5-10倍，但方法较繁琐，非特异性干扰因素也相对较多。

四十六、隔热滤板因能阻断红外线的透过而隔热。

四十七、时间分辨荧光免疫测定：原理：以镧系元素铕螯合剂作荧光标记物，利用其长荧光寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再进行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。特点：①荧光衰变期长②激发光和发射光之间有很大的Stokes位移，故易将激发光和发射光分开③激发光波范围较宽，可增加激发能，而发射光波范围很窄，进一步降低本底荧光，同时能量损失不大④荧光标记的相对比活性高。TRFIA检测灵敏度可达0.2-1ng/ml.

四十八、放射免疫技术原理是使用放射性碘标记抗原研究抗原抗体反应。待测Ag量与结合的Ag*-Ab复合物（B）成反比，与游离的Ag*（F）成正比。选用碘作标记物是因为它有适宜的半衰期。

四十九、聚乙二醇沉淀法：PEG能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分子蛋白质而不沉淀小分子抗原，因此PEG被广泛用于RIA试验作沉淀剂。方法快速、简便、沉淀完全，但非特异结合率高；而且受温度和pH影响大，当温度高于30摄氏度时，沉淀物易复溶。

五十、免疫放射分析的原理属于非竞争性免疫结合反应，是将放射性核素标记在抗体上，用过量的标记抗体与待测抗原反应，待充分反应后，除去游离的标记抗体，抗原标记抗体结合物的放射强度与待测抗原量呈正比关系。

五十一、免疫放射分析的特异性高，灵敏度高。放射性免疫分析的特异性较高，灵敏度较高。

五十二、直径60nm的胶体金溶液呈蓝紫色，吸收波长为nm。

五十三、金免疫测定技术是以硝酸纤维素膜为固相载体，以免疫金为结合物而设计的一种以肉眼观察判定、灵敏度较高、简便、快速的定性免疫金染色技术，主要包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验，现已用于多种临床检测项目，如HIV及甲胎蛋白的检测。

五十四、斑点金免疫层析试验目前常用于尿液HCCT的快速检测。①方法简便快速，可立等结果。②该方法只用作定性试验③该方法灵敏度不及酶免疫测定。

五十五、发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由较低能级的基态跃迁到较高能级的激发态，然后再返回到基态并释放光子的过程。化学发光与荧光的区别是形成激发态分子的激发能不同。荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光，化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发射的光。

五十六、常用的标记酶有1辣根过氧化物酶，鲁米诺作为底物2碱性磷酸酶，AMPPD作为底物，可产生持续稳定的发光。

五十七、吖啶酯是目前化学发光免疫分析中常用的发光标记物，特点是能瞬间发光。

五十八、三联吡啶钌是电化学发光免疫分析的电化学发光剂，电子供体为三丙胺（TPA）特点是可周而复始地发光，持续时间长，信号强度高。

五十九、外周血液中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。常用密度梯度离心法在密度为1.+-0.g/ml（只对人使用）。由于动物种属间单个核细胞比重的差别，其细胞分离液的比重不同，应用时应选取适当的分离液。密度梯度离心分离PBMC示意图中从上到下分别为血浆、单个核细胞、Ficous分离液、粒细胞、红细胞。

六十、淋巴细胞活力的测定常用台盼蓝染色法，原理：台盼蓝是一种阴离子型染料，活细胞由于细胞膜正常完整染料不能透过，故活细胞不着色；但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使细胞着色呈蓝色。计算活细胞百分率，通常活细胞应在95％以上。

六十一、CD3分子在人T细胞表面均可表达，是鉴定T细胞的标记。CD4分子是T细胞的辅助和抑制细胞诱导亚群的表面标记。CD8分子分布在抑制性T淋巴细胞和杀伤性T淋巴细胞表面。这些表面分子均是鉴别T细胞亚群的重要标志。

六十二、反映淋巴细胞功能的指标包括：淋巴细胞及其亚群的数量、淋巴细胞的转化功能、淋巴细胞活化后对下游细胞的调节等。细胞免疫功能测定包括①T淋巴细胞增值试验②T淋巴细胞介导的细胞毒试验③抑制性T淋巴细胞功能的检测④T淋巴细胞功能的体内试验检测（常用的结核菌束试验，试行超敏反应皮肤试验）

六十三、体液免疫功能检测的方法是B淋巴细胞的检测。B淋巴细胞功能的体内检测：①血清中免疫球蛋白含量测定②血清中血型抗体检测③特异性抗体产生能力的测定。反向溶血空斑形成试验是体外检测抗体形成细胞的方法。B淋巴细胞增值试验：1不同刺激物诱发增值试验2葡萄球菌诱导试验

六十四、细胞因子是由活化免疫细胞和某些基质细胞分泌的，能介导和调节免疫反应、炎症反应的小分子多肽。细胞因子的检测方法一般分为三大类：①生物学测定法是检测细胞因子某种特定的生物学活性②免疫学测定法是用免疫检测技术将细胞因子作为蛋白质抗原，用相应的特异性抗体进行测定，此法所测定的是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性并不一定成正比③分子生物学测定法是采用分子生物学技术检测细胞因子相应的DNA、RNA,反映的是细胞因子基因及其表达情况。

六十五、单克隆Ig血症也称为M蛋白，是由于单株浆细胞异常增生，产生大量的分子结构相同的Ig，属同质性Ig，这些Ig的独特型完全相同。而正常人的Ig如IgG则为多克隆浆细胞株产生的，是来自不同克隆的Ig分子。正常Ig包括与M蛋白同类的Ig的含量则显著降低。

六十六、一般以白蛋白商值反映血脑屏障功能，14~33为中度损伤。

六十七、人类白细胞抗原分型检测技术具体的分型方法包括血清学分型法、细胞学分型法和基因分型法。

六十八、目前普遍采用的血清学分型法为微量淋巴细胞毒试验或称为补体依赖的细胞毒试验。能够用此方法检测的抗原有HLA-A、-B,-C,-DR,-DQ。该方法的原理是带有特异HLA抗原的淋巴细胞在体外与已知型别的一系列标准抗HLA血清结合后，在补体参与下，引起淋巴细胞溶解死亡。死亡细胞的胞膜失去屏障作用而使染料透入细胞内，在倒置显微镜下观察，死亡细胞呈蓝色或粉红色，未致敏的活细胞则不着色。根据淋巴细胞的存活与否可以判定其表面是否具有与标准分型血清中抗体相对应的抗原。

六十九、HLA细胞学分型法是以混合淋巴细胞培养为基础的HLA分型技术，包括双向MLC和单向MLC。HLA-D和HLA-DP位点的抗原需用细胞学方法分型鉴定，故称为LD抗原。

七十、HLA的基因分型技术：1限制性片段长度多态性-聚合酶链反应2特异性寡核甘酸探针-聚合酶链式反应3序列特异性引物-聚合酶链式反应4单链构象特异性-聚合酶链式反应5基于基因测序的HLA分型6基因芯片

七十一、Ⅰ型超敏反应的发病机制1致敏阶段：变应原进入机体，激活CD4+Th2细胞和特异性B细胞，诱导产生特异性IgE抗体。IgE抗体吸附于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，使机体处于致敏状态2发敏阶段：已致敏机体再次遇到相同变应原而发生超敏反应的过程。

七十二、Ⅰ型超敏反应皮肤试验：当变应原通过皮肤挑刺，划痕，皮内注射等方法进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的特异性IgE结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质。应用在寻找过敏源。

七十三、Ⅳ型超敏反应皮肤试验：用皮内注射，皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏T细胞再次接触相同变应原后释放多种细胞因子，造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反应。应用：寻找过敏源，评价机体的细胞免疫功能状态。

七十四、皮肤试验出现假阳性的原因：①试验溶液配制不当②被试者皮肤反应性过强③试验抗原变质或试验抗原不纯④药物浓度过大。出现假阴性的原因：①试验抗原浓度过低，或因各种原因失效②患者皮肤反应较低③患者近期内使用过大量抗组胺类药或正使用免疫抑制剂等药物④患者过敏发作后检测。

七十五、聚乙二醇沉淀试验：原理是聚乙二醇是一种不带电荷的直链大分子多糖，有较强的脱水性。用3％-4％浓度的PEG可选择性地沉淀大分子CIC.评价：聚乙二醇沉淀法简单易行，容易普及，敏感度达20mg/LHAHG。但此法易受多种大分子蛋白和温度的干扰，特异性差。

七十六、亚单位疫苗是去除病原体中激发保护性免疫无关的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。

七十七、基因工程疫苗①重组抗原疫苗②重组载体疫苗③DNA（RNA）疫苗④转基因植物疫苗

七十八、疫苗的基本特征①安全②有效③实用

七十九、检测口蹄疫病毒抗原和病毒血清型的优选方法是ELISA方法，是一种间接夹心法。

八十、检验禽流感常用的免疫学方法为琼脂免疫扩散试验（AGID）广泛用于检测鸡和火鸡的特异性抗体，并可作为鸡群感染证据。

八十一、环境激素这一概念认为它们是并不直接毒害生命，但以激素面貌对生物体发生作用。即含量少，也会使生物体内的内分泌失调，生殖系统畸形。

八十二、化妆品安全性评价的免疫学检验常用人体斑贴试验。

八十三、免疫学检验项目有①细胞免疫功能的检测②体液免疫功能的检测③单核巨噬细胞功能的检测④NK细胞功能的检测

八十四、标本留取的质量控制①应注意严重溶血对检测结果的影响②应注意细菌污染对检测结果的影响③应注意标本保存方式对检测结果的影响，但冰冻保存的血清标本必须避免反复冻融，因反复冻融产生的机械剪切刀可对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，导致假阴性结果。血清抗凝不全会出现假阳性，免疫过程检测空腹血和餐后血无影响，采集不需要一次性仪器，干净的仪器即可。

八十五、对标准品及质控品的要求①与被测定物有相同的特性，活性稳定②物理性能均一，没有细菌污染③所用基质对测定结果无明显影响，标准品的基质通常为含蛋白的缓冲溶液，质控品的基质则应尽可能与临床常规实验中的待测标本一致④无生物传染性危险

八十六、定性的免疫检测方法有沉淀试验，凝集试验，荧光免疫试验和酶免疫试验等，测定结果以阴性或阳性判断。在实验时，应设置阴性与阳性对照，用以检测结果的可靠性。此类测定的质控要点是把握测定下限，应选择浓度接近试剂盒或方法测定下限的质控品进行质量控制。

八十七、定量的免疫检验方法主要有放射免疫试验，酶免疫试验和化学发光免疫试验等，后两者通常需要使用免疫分析仪。室内质控应选择特定试剂盒或方法测定范围内高、中和低三种浓度的质控品。

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